DNA凝膠成像的安全打開(kāi)方式
發(fā)布時(shí)間：2019-02-14 閱讀：1305次
瓊脂糖凝膠電泳分離技術(shù)是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離、鑒定和提純DNA片段常用的方法。通過(guò)在制膠時(shí)摻入或制膠后染色的方式，使熒光染料結(jié)合在DNA分子上，在特定光源的照射下便可確定DNA分子的位置。
早期，用于DNA瓊脂糖凝膠染色的染料多為EB（溴化乙錠），EB可以嵌入到DNA分子堿基對(duì)之間，在紫外光的激發(fā)下發(fā)出強(qiáng)的熒光。EB由于其靈敏度高、穩(wěn)定，而廣受歡迎。但由于EB為強(qiáng)誘變劑，具有高致癌性，實(shí)驗(yàn)者在操作EB時(shí)往往“提心吊膽”。后期，EB逐漸被一些EB替代物如GoldView、GelRed、Gelsafe等所替代，此類替代物雖然毒性明顯比EB降低，但大部分仍還是采用紫外光激發(fā)，實(shí)驗(yàn)操作者在觀察凝膠尤其是切膠時(shí)還是會(huì)暴露在紫外下。我們知道紫外線照射，會(huì)導(dǎo)致基因突變，人體長(zhǎng)時(shí)間接受紫外線的照射甚至?xí)T發(fā)皮膚癌。
有沒(méi)有什么既安果又好的方法？有！那就是藍(lán)光成像
藍(lán)光成像，顧名思議，采用藍(lán)光作為激發(fā)光源，所使用的與DNA結(jié)合的染料其佳激發(fā)波長(zhǎng)在藍(lán)光波段。下面就讓小編給大家安利一下藍(lán)光成像的好處。
安全
常見(jiàn)的藍(lán)光染料，其致突變性遠(yuǎn)低于EB數(shù)倍甚至數(shù)十倍。且此類染料佳激發(fā)波長(zhǎng)多是在400-500nm的可見(jiàn)光，檢測(cè)時(shí)采用可見(jiàn)藍(lán)光激發(fā)，整個(gè)凝膠檢測(cè)或回收過(guò)程中操作者無(wú)需暴露在紫外下， 避免紫外對(duì)人體損傷的可能。
靈敏
常見(jiàn)的藍(lán)光染料至少可檢測(cè)出20pg~50pg DNA，檢測(cè)核酸的靈敏度比EB染色法平均高10倍左右。SYBR Green I至少可檢出20pg DNA， 靈敏度比EB染色法高10至25倍。
不會(huì)造成DNA損傷
紫外光會(huì)造成核酸突變、缺刻等，影響下游的PCR擴(kuò)增效率、產(chǎn)物回收、連接轉(zhuǎn)化效率（某公司曾做過(guò)實(shí)驗(yàn)，將1.25 kb的基因片段在紫外光下暴露2分鐘，再切膠回收、連接、轉(zhuǎn)化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)平板上的克隆數(shù)幾乎為零）、RT-PCR擴(kuò)增效率等。藍(lán)光作為一種可見(jiàn)光對(duì)DNA樣品無(wú)任何損傷，不會(huì)影響下游實(shí)驗(yàn)。
